Группы крови. Определение группы крови и резус-фактора.

Система группы крови AB0

Определение группы крови по системе AB0 основано на выявлении на поверхности эритроцитов человека группоспецифических антигенов 0, A, B и изоиммунных антител анти-A (α) и анти-B (β) в сыворотке. Уникальная особенность системы AB0 заключается в наличии в плазме человека естественных антител α и β к отсутствующему антигену. Возможны шесть вариантов аллельных антигенов: 00, A0, AA, B0, BB, AB. Фенотипически выделяют четыре группы: 0(I), A(II), B(III), AB(IV)  гетеро- и гомозиготные варианты объединяют (в России используют буквенно-цифровое обозначение).
Агглютиногены Агглютинины
0 α и β
A β
B α
AB нет
  • 0(I): антигены A и B отсутствуют, антитела α и β – обнаружены (35 – 40 % населения в мире);
  • A(II): присутствует антиген A и антитела β (35 %);
  • B(III): обнаружен агглютиноген B и агглютинин α (15 – 20 %);
  • AB(IV): наличие агглютиногенов A и B, отсутствие агглютининов α и β (5 – 10 %).

По мере движения с запада на восток Евразии частота обнаружения антигена A падает, а антигена B возрастает. Антиген 0 редко встречается в Азии, но  имеет широкое распространение у коренных народов Южной Америки, Полинезии и Австралии. Причина – эпидемии инфекционных заболеваний.

Результат типирования крови записывают в историю болезни или в карту донора. Врач-трансфузиолог указывает дату и ставит подпись.

В отдельных случаях во время типирования наблюдается слабовыраженная агглютинация эритроцитов. Недостаточно выраженная реакция объясняется наличием слабых вариантов антигенов  A и B. Наибольшее клиническое значение представляют подгруппы A1 и A2. Впервые слабые варианты были обнаружены в 1911 году учеными Dungern и Hirszeld.

Позднее в 1930 году Landsteiner и Levine предложили названия подгруппы – A1 и A2. A2 встречается до 20 % в группе A и до 35 % в группе AB. Сыворотка лиц из образцов крови A2 может содержать анти-A1-антитела: в 2 % случаев в группе A2 и в 30 % в A2B. Антитела анти-A1 представляют опасность ввиду агглютинации эритроцитов группы A.

Частота выявления эритроцитов A2 существенно варьируется в зависимости от применяемых реагентов. Приводим сравнение результатов исследования при использовании различных методик определения групп крови A2 и A2B.

  • Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Диагностикум явно выраженно (на / ) агглютинирует A1 эритроциты сразу после смешения с образцом. Не агглютинирует A2 или вызывает мелкую агглютинацию на пятой минуте и позднее.
  • Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки.
  • Цоликлоны анти-A и анти-AB.
  • Цоликлон анти-A слабый.
Число проанализированных образцов Группа крови A (II) Группа крови AB (IV)
Число проанализированных образцов Группа A2 (II) в % Число проанализированных образцов Группа A2B (IV) в %
Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин) 1592 14,7 357 23,5
Цоликлоны: анти-A, анти-AB 3599 2,1* 357 7,03*
Цоликлон анти-А — слабый 3587 4,5* 357 11,2*
Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки 1592 17,4 344 34,2

Примечание: * — агглютинация выражена слабо, присутствуют мелкие агглютинаты на розовом фоне.

Наибольшую точность исследования обеспечивает Анти-A1 (лектин, фитогемагглютинин). Тест рекомендован для выявления подгрупп антигена A у детей младше двух лет. Причина – физиологическая незрелость эритроцитов новорожденных, влекущая ошибочные результаты исследования со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками.

В 1930 году Landsteiner и Levine обнаружили подтип Aint: промежуточный вариант между A1 и A2. Данный антиген характерен для негроидов и достигает 8,5 % у лиц с группой крови A. У европеоидов Aint наблюдался лишь у 1 % людей со второй группой крови. В крайне редких случаях у человека отсутствуют все антигены системы AB0. Фенотип «Бомбей» обусловлен генотипом hh. При отсутствии антигена H у лиц данной категории обнаруживаются анти-A и анти-B антитела.

Типирование по системе AB0 осуществляют в реакции прямой агглютинации с использованием стандартных гемагглютинирующих сывороток или типирующих реагентов с моноклональными антителами. Применение цоликлонов предпочтительнее ввиду абсолютной специфичности: каждый реагент не содержит примеси других антител, балластных белков и инфекционных факторов.

Для определения группы крови AB0 прямым методом используют две серии стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Подготовьте две серии сывороток трех групп с титром 1:32 или выше. Для забора каждой сыворотки используйте отдельную маркированную пипетку. Подготовьте сыворотку AB(IV) для контроля.

  1. Обеспечьте хорошее освещение и температуру воздуха 18 – 25 °C.
  2. Промаркируйте планшет: 0(I) – слева, A(II) – по центру, B(III) – справа. Вверху по центру укажите фамилию донора или номер анализируемой крови.
  3. Нанесите в лунки 1 – 2 капли (приблизительно 0,1 мл) сывороток в два ряда в соответствии с маркировкой планшета.
  4. Пипеткой или стеклянной палочкой поместите по одной маленькой капле исследуемых эритроцитов рядом с каплями сыворотки. Объем сыворотки должен примерно в 10 раз превышать объем эритроцитосодержащей жидкости.
  5. Перемешайте капли в лунках палочкой.
  6. Для ускорения реакции произведите легкое покачивание планшета.
  7. Спустя три минуты в лунки планшета, в которых началась агглютинация, добавьте по одной капле NaCl. Подождите еще две минуты.
  8. Спустя пять минут оцените результаты реакции в проходящем сете. В случае невыраженной агглютинации добавьте еще по одной капле NaCl.

Результаты реакции:

  • Отрицательная реакция в трех лунках свидетельствует об отсутствии антигенов на эритроцитах исследуемого образца. Кровь относится к группе 0(I).
  • Агглютинация в лунках с сыворотками 0(I) и B(III) говорит о наличии агглютиногена A и принадлежности к группе A(II).
  • Наступление реакции с сыворотками 0(I) и A(II) свидетельствует о присутствии антигена B и групповой принадлежности B(III).
  • Результаты реакции во всех лунках указывают на присутствие агглютиногенов A и B и соответствуют четвертой группе AB(IV).

В последнем случае следует удостовериться в отсутствии неспецифической реакции: нанесите на планшет 2 – 3 капли соответствующей группе AB(IV) сыворотки и добавьте одну каплю анализируемых эритроцитов. Перемешайте жидкости и оцените результат спустя пять минут. Отсутствие агглютинации свидетельствует о принадлежности к группе AB(IV), наличие – признак неспецифической реакции. В этом случае, а также при слабовыраженной агглютинации повторите исследование с другими сериями сывороток.

Моноклональные антитела к антигенам эритроцитов пришли на смену изогемагглютинирующих сывороток. Для каждого типирования достаточно одной серии реагентов анти-A, анти-B, анти-AB. Внедрение моноклональных реагентов позволило значительно упростить и стандартизировать методику определения группы крови AB0. Приводим краткое пошаговое руководство проведения исследования на планшете.

  1. Обеспечьте хорошее освещение. Работайте при комнатной температуре воздуха.
  2. Объект исследования – эритроцитосодержащие среды.
  3. Промаркируйте лунки планшета: анти-A, анти-B, анти-AB или используйте планшет с маркированной наклейкой.
  4. Нанесите примерно по 0,1 мл соответствующего моноклонального реагента в каждую из трех подписанных лунок.
  5. Добавьте приблизительно по 0,03 мл анализируемых эритроцитов рядом с каждой каплей диагностикума.
  6. Смешайте реагент с эритроцитами в лунках отдельными индивидуальными стеклянными палочками.
  7. Покачивайте планшет около трех минут.
  8. Проверьте наличие агглютинации в лунках.

Обычно реакция обнаруживается уже в первые секунды после смешивания. При этом слабые варианты антигенов A и B могут давать более позднюю агглютинацию.

отбор образца крови
внесение образца в лунку
планшет с внесенными образцами
добавление цоликлонов
планшет с эритроцитами и цоликлонами
смешивание исследуемых проб с реагентами

Методика определения группы крови основана на взаимодействии эритроцитов от предварительно типированных лиц групп 0, A, B или смеси эритроцитов от нескольких одногруппных доноров с изогемагглютининами α и β в исследуемой сыворотке.

При работе с каждым типирующим реагентом используйте сухие чистые пипетки. Промывание палочек для перемешивания и пипеток осуществляйте в 0,9 % растворе NaCl.

  • Подготовьте пластину или планшет. Обеспечьте хорошее освещение помещения.
  • Выполните забор 3 – 5 мл крови без стабилизатора в пробирку. Дайте сыворотке отстояться 1,5 – 2 часа при комнатной температуре.
  • Отмойте тест-эритроциты в 0,9 % физиологическом растворе. Подготовьте 5 % взвесь.
  • Промаркируйте секции на планшете: 0(I), A(II), B(III).
  • Поместите по 2 капли (приблизительно 0,1 мл) анализируемой плазмы в каждую из трех лунок.
  • Добавьте в лунки примерно по 0,03 мл тест-эритроцитов.
  • Отдельными палочками смешайте типированные эритроциты с сывороткой.
  • Аккуратно покачивайте планшет в течение 5 минут.
  • Проведите визуальную оценку результатов реакции агглютинации в проходящем свете.
Результаты анализа плазмы со стандартными эритроцитами Групповая принадлежность
0(I) A(II) B(III)
0(I)
A(II)
B(III)
AB(IV)

— наличие агглютинации, – — отрицательный результат реакции.

  • 0(I): реакция в лунках A(II), B(III) (обнаружены антитела α и β).
  • A(II): агглютинация с эритроцитами B(III) (выявлены агглютинины β).
  • B(III): агглютинация в лунке A(II) (определены агглютинины α).
  • AB(IV): отсутствие результатов реакции во всех лунках (антитела в плазме не обнаружены).

Levine и Stetson обнаружили антигены системы Резус в 1939 году. Ученые изучали причины развития гемолитических реакций у рожениц при трансфузиях женщинам идентичных по системам AB0, MN и P. эритроцитов мужей. Годом позже Landsteiner и Wiener продуцировали выработку антител посредством иммунизации кроликов эритроцитами обезьян макака-резус.

Система Резус объединяет 45 антигенов. Агглютиногены передаются по наследству и остаются неизменными на протяжении жизни. Иммуногенность убывает в следующем порядке: D {amp}gt; c {amp}gt; E {amp}gt; C {amp}gt; e. Каждый агглютиноген кодируется одним из двух тесно связанных генов: RHD отвечает за выработку D-антигена, RHCE – за продукцию антигенов Cc и Ee. Резус-положительными донорами считают лиц с антигенами D, C или E на поверхности эритроцитов. При отсутствии вышеперечисленных агглютиногенов доноров считают резус-отрицательными.
Adblock detector